HCAEC人類冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實驗室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時可用預(yù)實驗的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實驗選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實驗完成。

（4）消化細(xì)胞時應(yīng)避免消化時間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實驗進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀棄去上清后，應(yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

血液結(jié)構(gòu)型神經(jīng)元一氧化氮合成酶（cNOS/NOS1/nNOS）活性熒光定量檢測試劑盒

真菌細(xì)胞可溶性總蛋白制備試劑盒

定量PCR擴(kuò)增檢測試劑盒

石蠟切片組織CASPASE-9蛋白表達(dá)熒光顯微鏡檢測試劑盒

血液D比色法定量檢測試劑盒

石蠟切片免疫組織化學(xué)HRP酶聯(lián)DAB基礎(chǔ)檢測試劑盒（無一抗和二抗）

組織EPHB2激酶活性定量檢測試劑盒（A/B/C）

P21蛋白表達(dá)西方雜交分析試劑盒

人血液C－反應(yīng)蛋白（C-RP）免疫比濁法定量檢測試劑盒

植物磷脂酶D2（Phospholipase D2）活性比色法定量檢測試劑盒

精漿（seminal plasma）氧化應(yīng)激活性氧（ROS）NBT比色法定量檢測試劑盒

體外非細(xì)胞系統(tǒng)細(xì)胞色素P450亞酶CYP2A6（COUMARIN）活性

冰凍切片組織線粒體復(fù)合物V蛋白表達(dá)NBT顯色光學(xué)顯微鏡檢測試劑盒

血液血管緊張素Ⅰ轉(zhuǎn)化酶2（ACE2）活性比色法定量檢測試劑盒

植物脂質(zhì)比色法定量檢測試劑盒

孕激素受體β（MPRβ）抗體

鈣連蛋白重組兔單克隆抗體

親環(huán)蛋白PPIB（內(nèi)參）單克隆抗體

IQCE蛋白抗體

細(xì)胞分化蛋白SEPT10抗體

WNK4抗體

跨膜TMIGD1蛋白抗體

APC標(biāo)記人CD1a單克隆抗體

HCAEC人類冠狀動脈內(nèi)皮細(xì)胞鋅指蛋白703抗體

傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。