傳代培養(yǎng)操作步驟：

一、貼壁培養(yǎng)

細(xì)胞傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

（1）傳代前在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞形態(tài)和生長密度，當(dāng)細(xì)胞生長密度達(dá)到80%~90%時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（2）吸掉或倒掉培養(yǎng)瓶內(nèi)的培養(yǎng)液。加入PBS清洗1~2次，左右輕輕搖晃后棄掉。

（3）根據(jù)培養(yǎng)瓶大小向瓶內(nèi)加入適量含EDTA的，一般應(yīng)覆蓋整個(gè)培養(yǎng)瓶底。

（4）把培養(yǎng)瓶放入37℃ CO2培養(yǎng)箱進(jìn)行消化，2~5min后拿出放在倒置顯微鏡下進(jìn)行觀察，當(dāng)發(fā)現(xiàn)有70%~80%細(xì)胞收縮變圓、細(xì)胞間隙變大時(shí)，再輕輕拍打培養(yǎng)瓶使剩余細(xì)胞脫落，然后立即加入2倍量的培養(yǎng)液中止消化，使用吸頭輕輕吹打，混合均勻，以防消化過度。

（5）吸出所有細(xì)胞懸液至離心管內(nèi)，1000rpm/min離心3~5min。

（6）棄上清，加入適量培養(yǎng)液重懸細(xì)胞，輕輕吹打混勻，使細(xì)胞均勻分散。

（7）用吸頭吸取適量細(xì)胞懸液，以適宜的密度接種于新的培養(yǎng)瓶中，補(bǔ)足培養(yǎng)液，搖勻，放置于37℃ CO2培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng)。

（8）根據(jù)細(xì)胞生長狀態(tài)確定換液或傳代時(shí)間，甚至進(jìn)行細(xì)胞凍存。

DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞

細(xì)胞基本屬性：

細(xì)胞詳細(xì)介紹：

二、懸浮細(xì)胞

傳代培養(yǎng)操作步驟如下：

一般實(shí)驗(yàn)室中懸浮細(xì)胞傳代方法分為直接傳代法和離心傳代法（培養(yǎng)液中含有細(xì)胞碎片的情況下）。當(dāng)在顯微鏡下觀察到懸浮細(xì)胞已經(jīng)長滿至80%~90%（細(xì)胞懸液變黃）時(shí)，即可進(jìn)行傳代。

（1）嚴(yán)格進(jìn)行無菌操作，所用一切試劑及耗材均應(yīng)無菌，且須在無菌超凈工作臺中紫外照射30min以上，以免細(xì)胞發(fā)生污染。

（2）所用培養(yǎng)液必須適宜細(xì)胞生存和生長。來源于不同動(dòng)物種類、組織類型的細(xì)胞，對培養(yǎng)液的要求不一樣，必要時(shí)可用預(yù)實(shí)驗(yàn)的方法選擇適當(dāng)?shù)呐囵B(yǎng)液。

（3）胎牛血清對于維持細(xì)胞生存，促進(jìn)細(xì)胞生長起著關(guān)鍵作用?？筛鶕?jù)文獻(xiàn)或預(yù)實(shí)驗(yàn)選擇合適的胎牛血清。一旦確定，就應(yīng)保持用至實(shí)驗(yàn)完成。

（4）消化細(xì)胞時(shí)應(yīng)避免消化時(shí)間過短導(dǎo)致消化不收集到的細(xì)胞數(shù)量少，或消化時(shí)間過長導(dǎo)致細(xì)胞成團(tuán)塊樣絮狀游離，這時(shí)的細(xì)胞已有損傷或死亡，影響細(xì)胞數(shù)量和實(shí)驗(yàn)進(jìn)度。

（5）細(xì)胞離心的時(shí)候應(yīng)避免離心力過小收集的細(xì)胞數(shù)量不夠，或離心力過大對細(xì)胞產(chǎn)生損傷。離心后的細(xì)胞沉淀?xiàng)壢ド锨搴?，?yīng)先彈散細(xì)胞沉淀，再加入培養(yǎng)液重懸，這樣比直接吹打?qū)?xì)胞損傷小，可以提高細(xì)胞活率。

（6）吹打細(xì)胞時(shí)應(yīng)盡量避免細(xì)胞的產(chǎn)生，以免損傷細(xì)胞，影響細(xì)胞狀態(tài)（吹打過程中殘留部分液體在吸頭內(nèi)可以減少氣泡的產(chǎn)生）。

公司正在出售的產(chǎn)品：

人內(nèi)根殼細(xì)胞RNAHHIRSC miRNA5 μg 山羊內(nèi)啡肽(EP)ELISA試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/Alexa Fluor 555 Alexa Fluor 555標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

FUSIP1： 富含絲酸/精酸重復(fù)結(jié)構(gòu)蛋白抗體 小鼠樹突狀細(xì)胞肉瘤低轉(zhuǎn)移細(xì)胞(VAP33-GFP融合蛋白穩(wěn)定過表達(dá));DG6-VAP33-GFP 小鼠表皮黑色素細(xì)胞培養(yǎng)基 100mL

ICOSLG Others Human 人 ICOS Ligand / B7-H2 / ICOSLG 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 山羊腦啡肽(ENK)ELISA試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy5.5 PE-Cy5.5標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

FUT6： 巖藻糖基轉(zhuǎn)移酶6抗體 人腎上皮細(xì)胞總RNAHREpiC NA

QBC939細(xì)胞，人膽管癌細(xì)胞 褐鼠胰島素瘤上皮細(xì)胞,RIN-m細(xì)胞 NIH/3T3, 小鼠成纖維細(xì)胞系 山羊檢測(e)ELISA 試劑盒 Goat Anti-Chicken IgG/PE-Cy7 PE-Cy7標(biāo)記的羊抗雞IgG 0.1ml

CA1 Others Human 人 CA1 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 大鼠透明質(zhì)酸結(jié)合蛋白(HABP)ELISA 試劑盒 NT-3  人神經(jīng)營養(yǎng)因子3 96T

Muc2： 粘蛋白-2/上皮膜抗原2抗體 人生發(fā)基質(zhì)細(xì)胞裂解物HHGMCL

MS1小鼠胰島內(nèi)皮細(xì)胞 MS1 mouse islet endothelial cells DMEM培養(yǎng)基+5%FBS 大鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA試劑盒 NGF(Human Nerve growth factor)  人的神經(jīng)生長因子 96T

Mucin 4： 粘蛋白4抗體 HA Others H5N1 甲型流感 H5N1 (A/bar-headed goose/Qinghai/14/2008) 血凝素 (Hemagglutinin / HA) 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

CL-0191RBE(人膽管癌細(xì)胞)5×106cells/瓶×2 大鼠透明質(zhì)酸(HA)ELISA 試劑盒 OFQ/N(Mouse orphanin FQ/nociceptin)  小鼠孤腓肽 96T

DiFi人結(jié)直腸癌細(xì)胞P388細(xì)胞，小鼠白血病細(xì)胞 空腸彎曲桿菌 大額牛皮膚成纖維樣細(xì)胞;BOS-1 人苯諾龍/苯去(NP)ELISA 試劑盒 MLC/Myosin light chain 3 peptide 肌球蛋白輕鏈3抗原 0.5mg

IFNGR1： 干擾素-gamma受體1抗體 FAS Others Mouse 小鼠 FAS / TNFRSF6 / CD95 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照)

人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞;HCT-15 [HCT15] 人苯(LPA)ELISA 試劑盒 MIF (Macrophage Migration Inhibitory Factor) 巨噬細(xì)胞移動(dòng)抑制因子抗原 0.5mg

IL-1 Alpha Propeptide： 白介素1α前肽/IL-1α前肽抗體 人前列腺癌細(xì)胞;DU 145 [DU145;DU-145]

P815(小鼠肥大細(xì)胞瘤細(xì)胞) 5×106cells/瓶×2 人 CD1B & B2M Heterodimer 人細(xì)胞裂解液 (陽性對照) 人本周蛋白(BJP) ELISA 試劑盒 MIP-1 Beta (macrophage inflammatory protein 1 Beta) 巨噬細(xì)胞炎癥因子1β 抗原 0.5mg