商品屬性：

背景：

GDF-3（以前稱為 Vgr-2）是一種 TGF-beta 超家族成員，屬于生長/分化因子家族。因子家族的成員。GDF-3 在未分化的胚胎干（ES）細胞、白色脂肪組織和大腦中表達。366氨基酸（aa）的小鼠 GDF-3 含有 22 aa 的信號序列:、230 aa 的前肽和 114 aa 的成熟蛋白。含有一個潛在的 N-糖基化位點。成熟區(qū)包含一個半胱結結構，該結構在整個的半胱結結構。然而，它缺少負責形成分子間二硫鍵的第四個半胱，因此 GDF-3 可能存在一個 N.鍵，因此 GDF-3 可能以非共價的同源二聚體形式存在。成熟的人類 GDF-3 與小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83% 和 83% aa 的序列:相同性。小鼠和大鼠的 GDF-3 有 83%、83% aa 的序列:相同性。大部分 GDF-3 以未水解的前體形式存在。未加工的前體和成熟的前體似乎都有活性:，但活性:可能有所不同。所有形式都能對抗 BMPs。在 ES 細胞中，抑制 BMP2 信號傳導的GDF-3 可維持多能性。GDF-3 還影響早期細胞命運的決定；例如，缺失小鼠 GDF-3會導致胃前期胚胎的前內臟內胚層出現(xiàn)缺陷。在胚胎發(fā)生過程中，GDF-3 與 GDF-1 相互合作。

標記：

1.將細胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標記培養(yǎng)基。

2.提前將2×EdU標記培養(yǎng)基預熱，然后將150微升2×EdU標記培養(yǎng)基與等體積細胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。

【注】：①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會影響細胞增殖的速度。②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細胞為宜。

3.孵育細胞2 h，棄培養(yǎng)基。

【注】：①培養(yǎng)時間取決于細胞的增殖速度和生長狀態(tài)。②大多數(shù)腫瘤細胞以及粘附細胞系均可采用2 h的孵育時間。

4.以1xPBS清洗細胞兩次，每次5 min, 以除去未摻入DNA的EdU殘留。

【注】：對于貼壁不牢的細胞可降低清洗強度。

實驗步驟：

1. 將細胞以 104-105 個細胞/孔的密度接種在 96 孔板 中，加入 100μL 培養(yǎng)基，含或不含待測化合物。在 CO2 培養(yǎng)箱中在 37℃ 下培養(yǎng)細胞 24 小時。

2. 向板中加入 10μL 不同濃度的待測物質。

3. 在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當時間（如 6、12、24 或 48 小時）。

4. 向板的每個孔中加入 10μL CCK-8 溶液。小心不要將氣泡引入孔中。

5. 將平板在培養(yǎng)箱中孵育 1-4 小時。

6. 在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。

7. 使用酶標儀測量 450nm 處的吸光度。

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