G-CSF是一種造血生長(zhǎng)因子，可控制粒細(xì)胞的生成、分化和功能，并增強(qiáng)成熟末端細(xì)胞的功能活性。已發(fā)現(xiàn)G-CSF基因有三種轉(zhuǎn)錄變體，編碼三種不同的亞型。粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞集落刺激因子是一種細(xì)胞因子，通過控制血液中兩種相關(guān)白細(xì)胞群（粒細(xì)胞和單核-巨噬細(xì)胞）的產(chǎn)生、分化和功能，在造血過程中發(fā)揮作用。
標(biāo)記：
1.將細(xì)胞培養(yǎng)基與EdU溶液按照500：1的比例混合，制成2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基。
2.提前將2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基預(yù)熱，然后將150微升2×EdU標(biāo)記培養(yǎng)基與等體積細(xì)胞培養(yǎng)基混合，獲得1×EdU溶液。
【注】：
①不建議替換全部培養(yǎng)基，這樣可能會(huì)影響細(xì)胞增殖的速度。
②配置好的培養(yǎng)基建議現(xiàn)用現(xiàn)配，用量以沒過細(xì)胞為宜。
3.孵育細(xì)胞2h，棄培養(yǎng)基。
【注】：
①培養(yǎng)時(shí)間取決于細(xì)胞的增殖速度和生長(zhǎng)狀態(tài)。
②大多數(shù)腫瘤細(xì)胞以及粘附細(xì)胞系均可采用2h的孵育時(shí)間。
4.以1xPBS清洗細(xì)胞兩次，每次5min，以除去未摻入DNA的EdU殘留。
【注】：對(duì)于貼壁不牢的細(xì)胞可降低清洗強(qiáng)度。
實(shí)驗(yàn)步驟：
1.將細(xì)胞以104-105個(gè)細(xì)胞/孔的密度接種在96孔板中，加入100μL培養(yǎng)基，含或不含待測(cè)化合物。在CO2培養(yǎng)箱中在37℃下培養(yǎng)細(xì)胞24小時(shí)。
2.向板中加入10μL不同濃度的待測(cè)物質(zhì)。
3.在培養(yǎng)箱中將培養(yǎng)板培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間（如6、12、24或48小時(shí)）。
4.向板的每個(gè)孔中加入10μL CCK-8溶液。小心不要將氣泡引入孔中。
5.將平板在培養(yǎng)箱中孵育1-4小時(shí)。
6.在讀板之前，在定軌振蕩器上輕輕混勻。
7.使用酶標(biāo)儀測(cè)量450nm處的吸光度。
滬ICP備17029297號(hào)-5 管理登陸 技術(shù)支持：化工儀器網(wǎng) GoogleSitemap