1．亮發(fā)光桿菌菌種準(zhǔn)備

1) 發(fā)光細(xì)菌新鮮菌懸液的制備

(1) 斜面菌種培養(yǎng)。于測定前48h取保存菌種，于新鮮斜面上接出*代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)24h立即轉(zhuǎn)接第二代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h，再接出第三代斜面，(20±0.5)℃培養(yǎng)12h后備用。每次接種量不超過1接種耳。

(2）搖瓶菌液培養(yǎng)。取第三代斜面菌種近1環(huán)，幾接種于裝有50mL培養(yǎng)液的250mL三角瓶內(nèi)，(20±0. 5) ℃ ,184r/min下培養(yǎng) 12-14h，備用。

(3) 將培養(yǎng)液稀釋至每毫升108一109個細(xì)胞，初始發(fā)光度不低于800mV，置冰浴中備用。

2）菌液復(fù)蘇

取冷藏的發(fā)光菌凍干粉，置冰浴中，加入0. 5mL冷的2 % NaCl溶液，充分搖勻，復(fù)蘇2min，使其具有微微綠光，初始發(fā)光度不低于800mV。

2．樣品采集與處理

1) 水樣

(1) 從不同工業(yè)廢水的各排放口，每4h采樣一次，每次取樣后于4℃保存，連續(xù)采集24h后，均勻混合后備用。

(2) 納污水體取其入口、中心、出口三個斷面混合水樣備用。

(3）以同上方法采集清潔水，作空白對照。

濁度大的污水，需靜置后取上清液。一般樣品不需加任何處理。水樣按3%比例投加NaCl，置冰箱備用。

2) 氣體樣品

以大氣采樣法采取一定體積的大氣樣品，通過氣體吸收液（(5mL)中吸收，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用，同法收集清潔空氣作為對照組。

3) 固體樣品

取固體廢棄物，按《工業(yè)固體廢棄物有害特性試驗與監(jiān)測分析方法》制備浸出液，取上清液，按3％比例投加NaCl，置冰箱備用。

3．亮發(fā)光桿菌實驗濃度的選擇

在預(yù)備實驗的濃度范圍內(nèi)，按等對數(shù)間距或百分濃度取3-5個實驗濃度，同時設(shè)空白對照和參比毒物系列濃度組。

4．發(fā)光細(xì)菌法生物毒性瀏定

1) 工業(yè)廢水或有毒物質(zhì)的生物毒性測定

(1) 發(fā)光菌懸液初始發(fā)光度測定。取4. 9mL 3%NaCl溶液于比色管內(nèi)，加新鮮發(fā)光菌懸液或凍干粉復(fù)蘇菌懸液10μL，若測量發(fā)光度在800mV以上，允許置冰浴中備用。

(2) 取已處理待測廢水樣品，按等對數(shù)間距或百分濃度編號，并注明采集點。

(3) 按表4-40-1依次加入稀釋液，待測水樣及參比毒物系列濃度溶液。

(4) 打開生物毒性測試儀電源，預(yù)熱15min，調(diào)零點，備用。

(5) 每管加入菌懸液10μL，準(zhǔn)確作用5 min或15min，依次測定其發(fā)光強度，記錄毫伏數(shù)。

每個濃度設(shè)3管重復(fù)。

2) 工業(yè)廢氣（或有害氣體）的生物毒性測定

(1) 氣體直接通入法。用注射器直接注入氣體于菌懸液中，經(jīng)10-20min測定發(fā)光菌強度的變化。

(2) 氣體吸收法。方法同工業(yè)廢水測定法。

(3) 固體亮發(fā)光桿菌落法。挑選固態(tài)培養(yǎng)對數(shù)生長期的發(fā)光菌單菌落，連同培養(yǎng)基切下，置比色管內(nèi)，測定初始發(fā)光強度，然后用注射器將待測氣體注入菌苔表面，經(jīng)10-20min后，測定發(fā)光度的變化。